人類基因組編碼的所有蛋白質中，其中30%是膜蛋白并且膜蛋白占藥物靶點的60%以上^[1]。膜蛋白廣泛存在于細胞膜和細胞器上，是生命活動的核心調控者[2]。膜蛋白失調會引發多種疾病，所以膜蛋白成為許多藥物開發的靶點^[2]。

圖1：七次跨膜（7TM）受體信號傳導

Seven-transmembrane receptors. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002

1、在細胞體系中表達成功率低

由于跨膜結構域有很強的疏水性，所以在細胞內容易導致蛋白錯誤折疊或者聚集。而且許多膜蛋白對細胞有毒性，會直接導致宿主細胞死亡^[5]。所以會導致大多數膜蛋白在細胞體系內難以高效表達。

2、正確的構象依賴磷脂雙分子層

大多數膜蛋白只有依賴天然的膜結構才能正確折疊，但是傳統細胞表達系統難以精準提供這些環境^[6]。

3、去垢劑篩選困難，純化成本較高

不同膜蛋白對去垢劑的偏好不同，需要大量實驗篩選，并且純化過程中容易破壞折疊狀態^[5]。

4、穩定性差、純度低

1. 無細胞毒性

無細胞表達技術不涉及細胞內環境，所以不受細胞毒性的影響，可以表達對宿主有毒性的通道蛋白或者跨膜蛋白。

2、可添加去垢劑、納米盤等輔助折疊

可以合成接近天然膜的折疊環境，顯著提升膜蛋白的表達量、成功率和功能活性。

3、開放性體系、可控性高

4、可實現快速構建和篩選

適合突變體篩選和高通量蛋白功能篩選平臺。

圖2：無細胞系統與傳統系統流程圖

珀羅汀生物基于自主開發的無細胞蛋白表達體系，已構建了從試劑盒到一站式膜蛋白表達服務的產品體系。通過在表達反應中引入納米盤、去垢劑等折疊輔助因子，能夠有效提升多跨膜受體、轉運體、離子通道等難表達膜蛋白的可溶性與功能性獲得。公司已在多種膜蛋白項目中實現結構研究級別的表達量與活性，顯著縮短科研客戶從“基因 → 功能蛋白"的研發周期。

未來，隨著納米盤輔助折疊、非天然氨基酸標記、自動化高通量篩選等技術持續迭代，珀羅汀無細胞平臺將進一步擴大在膜蛋白結構生物學、抗體藥物發現、新靶點驗證等方向的應用范圍，為科研與藥物研發提供更高成功率、更短周期、更高確定性的膜蛋白解決方案。

[1] Overington JP, Al-Lazikani B, Hopkins AL. How many drug targets are there?. Nat Rev Drug Discov. 2006;5(12):993-996. 

[2] Venkatakrishnan AJ, Deupi X, Lebon G, Tate CG, Schertler GF, Babu MM. Molecular signatures of G-protein-coupled receptors. Nature. 2013;494(7436):185-194. 

[3] Pierce KL, Premont RT, Lefkowitz RJ. Seven-transmembrane receptors. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002;3(9):639-650.

[4] White SH, Wimley WC. Membrane protein folding and stability: physical principles. Annu Rev Biophys Biomol Struct. 1999;28:319-365.

[5] Seddon AM, Curnow P, Booth PJ. Membrane proteins, lipids and detergents: not just a soap opera. Biochim Biophys Acta. 2004;1666(1-2):105-117.

[6] Corradi V, Mendez-Villuendas E, Ingólfsson HI, et al. Lipid-Protein Interactions Are Unique Fingerprints for Membrane Proteins. ACS Cent Sci. 2018;4(6):709-717.